标题：	端锚酶反义寡核苷酸和反义端粒酶催化亚单位联合作用对肺癌细胞端粒影响及机制研究
登记号：	wk200803005
分类号：
完成单位：	武汉市普爱医院
主要完成人员：	卢宏达 黄 涛 申雯竹 冯 刚 甄 燕 冯觉平 孔庆志
组织鉴定单位：	武汉市科技局
鉴定日期：	2008-02-20
工作起止日期：	2003-03-10 至 2007-12-12
鉴定内容：	本课题得到了武汉市青年科技晨光计划的资助（项目编号:20035002016-20）。 端粒是真核生物细胞染色体末端的特殊核酸蛋白结构。端粒长度的维持对于肿瘤细胞保持无限增殖的永生化倾向至关重要，而通过抑制端粒酶来控制肿瘤是近年来国内外学者关注的热点之一。然而，理论推理的逻辑性并没有给临床带来满意的效果，究其原因是因为除了端粒酶之外，还有众多的端粒相关蛋白因子参与端粒的调控，因此设想通过对两种端粒长度的正向调节因子端锚酶、端粒酶的联合抑制提高端粒的调节效能，为研究肿瘤基因治疗的新靶点作准备。 研究方法：通过合成端锚酶反义寡核苷酸和反义端粒酶催化亚单位寡核苷酸，以其相应的正义寡核苷酸为对照，采用脂质体法将其导入端粒酶阳性的人肺腺癌细胞A549。观察端锚酶、端粒酶两种反义寡核苷酸联合作用对端粒酶催化亚单位（hTERT）mRNA转录、端粒酶及端锚酶蛋白质表达水平的影响；探讨两种反义寡核苷酸作用对细胞端粒长度的影响。研究两种反义寡核苷酸与Bcl-2凋亡基因家族相互作用的联系，收集其基因学证据。观察两种反义寡核苷酸持续作用下A549细胞形态学的改变，细胞传代与端粒缩短之间的相互关系，细胞氚摄取率及X-Gal转染率等功能学改变，探讨其肿瘤基因治疗的潜在价值。 研究的初步结果表明：①端锚酶反义寡核苷酸通路是完全有别于端粒酶的端粒抑制途径。②端锚酶和端粒酶催化亚单位反义寡核苷酸两者联合作用具有协同效应，能加剧端粒长度的快速缩短，使细胞很快进入端粒危机的状态；表现在细胞增殖倍数明显减少，逐渐由无限增殖趋向衰老、凋亡。③端锚酶和端粒酶催化亚单位反义寡核苷酸协同作用的机理与mcl-1基因转录及转录后水平的调节紧密相连，有可能消除单纯端粒酶反义寡核苷酸所致的潜在耐药性。 本课题的创新点在于：①研究、探讨了端锚酶、端粒酶两种反义寡核苷酸联合抑制肿瘤细胞的作用；②在国内首次将定量免疫原位杂交及流式细胞术相结合运用于端粒长度的精确测定；③通过对端锚酶、端粒酶抑制剂联合作用机制的研究，将肿瘤细胞的凋亡与凋亡基因相互联系，为肿瘤靶向药物研究提供了新思路。